1.平皿法
平皿法包括倾注法和涂布法。除另有规定外,取规定量供试品,按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定,每稀释级每种培养基至少制备2个平板。
培养和计数 除另有规定外,胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30~35℃培养3~5天,沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20~25℃培养5~7天,观察菌落生长情况,点计平板上生长的所有菌落数,计数并。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后,计算各稀释级供试液的平均菌落数,按菌数规则菌数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15,,则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。
菌数规则 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级,作为菌数的依据。取zui高的平均菌落数,计算1g、1ml或10c㎡供试品中所含的微生物数,取两位有效数字。
如各稀释级的平板均无菌落生长,工作台,或仅zui低稀释级的平板有菌落生长,但平均菌落数小于1 时,以<1 乘以zui低稀释倍数的值菌数。
根据产品类型,在供试品刚接种(0时)及表2规定的间隔时间,分别从上述每个容器中取供试品1ml(g),用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释成1:10、1:102、1:103等稀释级。采用平皿法(照附录Ⅺ J微生物限度检查法,其中测定细菌用胰酪胨大豆琼脂培养基,空气,测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基)测定每份供试品中所含的菌数。
8.6.2根据菌数测定结果,计算1ml(g)供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数,并换算成lg值。
各品种项下规定的微生物限度标准解释如下:
10^1cfu:可接受的zui大菌数为20;
10^2cfu:可接受的zui大菌数为200;
10^3cfu:可接受的zui大菌数为2000,依此类推。
若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查结果均符合该品种项下的规定,判供试品符合规定;若其中任何一项不符合该品种项下的规定,判供试品不符合规定。
稀释液、冲洗液及培养基
见非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法(通则1106)。