纯化水微生物分析方法验证-微生物分析方法验证-世纪久海

微生物限度法及其方法验证的主要特点，在于检验对象本身的特殊性。具体特殊性表现为：      

1.能繁殖的生物。该处于不稳定状态，可随存放时间延长而亡，也可在适宜条件下大量繁殖。而条件的状况不一可使其生长情况各异，因而常出现同批样品在不同条件下，有不同的结果。但在保存条件相对稳定时，微生物在一定时间内处于动态平衡，在标准化的条件下操作结果仍可予与正确评估。      

2.不确定性。药品受微生物的污染，其种类可以多样，污染情况依生产、设备、原料、管理、剂型等条件而定，物体微生物分析方法验证，非药品本身固有。被污染批次中的不合格品是一个随机变量。      

3.分布的不均匀性。这种不均匀性源于污染源的复杂性，如原辅料污染，工艺污染，空间污染和操作人员污染。再者，微生物具有簇团性，簇团大小，紧密程度是可遗传的，簇团的分散性差异较大，该特点无疑强化了不均匀性。

计数方法适用性试验中，采用平皿法或薄膜过滤法时，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5～2范围内；采用MPN法时，试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内。若各试验菌的回收试验均符合要求，照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。

   方法适用性确认时，若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求，那么选择回收接近要求的方法和试验条件进行供试品的检查。

   供试品检查

   检验量

   检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或c㎡）。

   一般应随机抽取不少于2个zui小包装的供试品，混合，取规定量供试品进行检验。

   除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100c㎡；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。检验时，应从2个以上zui小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。

   供试品的检查

   按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。

   胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。

   阴性对照试验 以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长，如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调査。

——{微生物}常规鉴定技术二——

(二)生理生化试验

微生物生化反应：指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。

微生物检验中常用的生化反应有：

1、糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。

2、淀粉水解试验

某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，表面微生物分析方法验证，遇碘不再变蓝色。

3、v-p试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酸，丙酸缩合，微生物分析方法验证，脱羧成乙酰，后者在强碱环境下，纯化水微生物分析方法验证，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称v－p(+)反应。